Etapas específicas do cultivo celular

1. Equipamento común

1. Equipamento en sala de preparación

Destilador único de auga destilada, destilador dobre de auga destilada, depósito de ácido, forno, ola a presión, armario de almacenamento (almacenamento de artigos non esterilizados), armario de almacenamento (almacenamento de artigos esterilizados), mesa de envasado.Equipos na sala de preparación da solución: balanza de torsión e balanza electrónica (pesar medicamentos), medidor de pH (medición do valor de PH da solución de cultivo), axitador magnético (configuración da sala de solución para axitar a solución).

2. Equipamento da sala de cultura

Tanque de nitróxeno líquido, armario de almacenamento (almacenamento de artigos diversos), lámpada fluorescente e lámpada ultravioleta, sistema de purificación de aire, frigorífico de baixa temperatura (-80 ℃), aire acondicionado, cilindro de dióxido de carbono, mesa auxiliar (escribir rexistros de proba).

3. Equipos que se deben colocar na sala estéril

Centrífuga (recollida de células), mesa de traballo ultra-limpa, microscopio invertido, incubadora de CO2 (cultivo de incubación), baño de auga, máquina de desinfección e esterilización de tres osíxenos, neveira de 4 ℃ (colocando soro e solución de cultivo).

2、 Operación aséptica

（1） Esterilización de cuarto estéril

1. Limpe a sala estéril regularmente: unha vez por semana, primeiro use auga da billa para fregar o chan, limpe a mesa e limpa a mesa de traballo, e despois use lisol 3 ‰ ou bromogeramina ou ácido peracético ao 0,5%.

2. Esterilización da incubadora de CO2 (incubadora): primeiro limpa con bromoxeramina 3 ‰, despois limpa con alcohol ao 75% ou ácido peracético ao 0,5% e despois irradia con lámpada ultravioleta.

3. Esterilización antes do experimento: acende a lámpada ultravioleta, o esterilizador de tres osíxenos e o sistema purificador de aire durante 20-30 minutos respectivamente.

4. Esterilización despois do experimento: limpe a mesa ultralimpa, a mesa auxiliar e a platina do microscopio invertido con alcohol ao 75 % (bromoxeramina 3 ‰).

Preparación para esterilización do persoal de laboratorio

1. Lavar as mans con xabón.

2. Use roupa de illamento, gorros de illamento, máscaras e zapatillas.

3. Limpar as mans cunha bóla de algodón ao 75 %.

Demostración da operación estéril

1. Todas as botellas de alcohol, PBS, medio de cultivo e tripsina introducidas no banco de traballo ultralimpo deben ser limpadas con alcohol ao 75% na superficie exterior da botella.

2. Operar preto da chama da lámpada de alcohol.

3. Os utensilios deben esterilizarse antes de utilizalos.

4. Os utensilios (como as tapas das botellas e os contagotas) que se seguen a utilizar deben colocarse nun lugar alto e aínda así deben estar sobrequentados durante o seu uso.

5. Todas as operacións deben estar preto da lámpada de alcohol, e a acción debe ser lixeira e precisa e non debe tocarse ao azar.Se a palla non pode tocar o depósito de líquido residual.

6. Ao aspirar máis de dous tipos de líquido, preste atención á substitución do tubo de aspiración para evitar a contaminación cruzada.

Consulte o seguinte capítulo para a desinfección dos instrumentos.